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返回花药的培养主要有三种：一是在琼脂固化培养基表面培养，二是在加入30%Ficoll的液体培养基表面漂浮培养，三是利用固态液体双层培养基培养，以便既能保持较高的接种密度，培养基又不易失水干涸。
花药对培养温度的要求因物种而不同，对于大多数小麦品种来说，在培养的最初6d给以30、32℃的较高温度，然后再转人28、30·c下培养，花药出愈率会有明显提高。水稻花药培养的适宜温度从一开始就是27·C。愈伤组织分化阶段对温度的要求不像诱导阶段那样严格，例如小麦在17℃和30℃下花粉愈伤组织分化频率没有显著差异，水稻花粉植株的分化也多在和诱导期间相同的温度下进行。
对光照的要求在物种间差异更为明显，例如连续光照可显著增加烟草花粉胚的产量，却强烈抑制曼陀罗的花粉胚胎发生。禾谷类植物在花粉愈伤组织诱导期间则以暗培养或散射光培养效果较好，强光会抑制小麦花粉愈伤组织的形成。愈伤组织的分化原则上都应在光照下进行，但对光照强度和照光时间的要求则因物种而异。例如水稻花粉愈伤组织在转人分化培养基之初仍不宜照光培养，须待3～5d后再给以每天14h1000～2000lx的光照，以免引起愈伤组织的老化坏死。对小麦花粉植株则不宜给以长日照。
