新建组培室好选择在空气清新、光线充足、通风良好、环境清洁、水电齐备、交通便利的地方,避开各种污染源,以利于组织培养的顺利进行,降低培养过程的污染率,培育出优质试管苗。也可因地制宜地利用现有房舍,按照组培室的要求改造成组培室,做到因陋就简,既能开展研究和生产工作,有不花费过多。
植物组织培养实验室的大小可根据各自的工作性质和生产规模来设计,面积可大可小,主要用于科研和小规模生产的,面积较小;进行大规模工厂化生产的,面积较大,也常称为“组培工厂”。不论是实验室还是组培工厂,其建造要求、结构和功能基本相同,只是规模大小不同而已。
一个大型的组培室可设置洗涤室、药品室、称量室、培养基配制室、灭菌室、接种室、培养室、观察记录室、储藏室等,另外在室外还配有一定面积移苗温室。小型组培室可在同类中加以合并,如洗涤室、培养基配制室、灭菌室合并为一个准备室,药品室、称量室、观察记录室合并为一个综合实验室。但是接种室、培养室和移苗室都需要单独设置。
组培室布局要合理,通常按组织培养的工作程序,安排成一条连续的生产线,避免因有的环节倒排,而增加以后工作的负担或引起混乱。设计时要做到工作方便,减少污染,节省能源,应设有消防设施,安全使用。
1.洗涤室
洗涤室专门负责植物材料的初步清洗处理(例如把带泥土和杂菌多、易污染的部位削掉,以便进一步冲洗消毒)、试管苗出瓶、玻璃器皿等清洗与整理工作,室内应配备1至几个水槽或清洗玻璃器皿的机器,1~2个洗液缸,为防止碰坏玻璃器皿,可铺垫橡胶,地面要耐湿并能排水,上下水道要畅通,备有塑料筐用于运输培养器皿,备有干燥架用于放置干燥刷净的培养器及存放干净玻璃器皿的柜子等,把灭菌锅、蒸馏水发生器放在此室内。
2.准备室
主要用于植物细胞组织培养和试管苗生产所需要的各种器具的干燥和保存,培养基药品的称量、溶解、配制、分装和高压灭菌、化学试剂的存放及配制,重蒸水的生产、植物材料的预处理及培养物的常规生理生化分析等操作都在准备室中进行。为了配制各种培养基,室内必须有一个较大的平面工作台及存放各种培养基所需化学试剂的药品柜,以及放置常用玻璃器皿、试剂和常用的设备等。准备室要求面积大、明亮、墙上安装有换气扇,墙的内壁和工作台都要采用耐腐蚀的材料。为了避免工作人员进出时将杂菌带入,准备室中也可安装紫外灯,随时可以灭菌。
3.接种室
接种室是进行植物材料的分离接种、培养物的转移、试管苗的继代等的一个重要操作实验室,无菌条件的好坏、持续时间的长短对降低培养物的污染。提高效率关系很大。接种室除了出入口外,其余应全部密闭,一般不安装风扇,保证没有空气对流,通风换气需借助空气调节装置进行。接种室的面积要看工作量的大小、接种人员的多少及接种设备的情况而定,在工作方便的前提下,接种室宜小不宜大,一般10~12m2,为便于放置超净工作台门需稍大,应装成双扇滑门,以减少开关门时的空气扰动,要求地面、天花板及四壁尽可能密闭光滑,易于清洁和消毒。室内干爽安静,清洁明亮,在适当位置安装1~2盏紫外线灯,用以照射灭菌消毒,好安装一台小型空调,使室温可控,这样可使门窗紧闭,减少与外界空气对流。如果有条件可将接种室外再设置一个缓冲间,面积3m2为宜,进入无菌操作室前在此更衣换鞋帽等,以减少进出时带入杂菌,缓冲间好也安装一个紫外线灭荫灯,用以照射灭菌。
4.培养室
为满足培养材料生长、繁殖所需的温度、光照、湿度和通风等条件,一般培养室要求非常卫生、恒温并有理想的光照控温系统。培养室的温度应当是可控的,为使温度恒定和均匀,应配有带自动控温的电暖气或空调等设备,使温度保持在(25±2)℃,晚上一般不应低于20℃。由于热带植物和寒带植物等物种要求不同温度,好不同物种有不同的培养室。若要求更高或更低的温度,可使用装有荧光灯的培养箱。
培养室应建在房屋的南面,除南面有大窗户外,东边或两边也应有大窗户,以便尽量利用自然光。培养室的大小,可根据需要培养架的大小、数目以及其他附属设备而定,其设计以充分利用空间及节省能源为原则,高度比培养架略南为宜,周围墙壁要求有绝热防火的性能,好装成滑门,便于保温,节省能源。
现代组培文验窒大多设计为采用天然太阳散射光作为主要能源。这样可以节约能源,而且组培苗接受太阳光生长良好,驯化易成活。培养室的光源通常采用普通的白色日光灯,可在阴天用于补光,但有些情况下也需要较强的光照或完全黑暗。光源设备上可安装定时开关钟,无须每天要人工开关灯,一般需要每天光照10~16h。暗培养一般是在生化培养箱里进行的。在培养室内应设有若干培养架以放置培养物,培养材料放在培养架上培养。培养架大多金属制成,一般设5层,低一层离地高约20cm,其他每层间隔30cm左右,培养架高1.7m左右。培养架长度都需依日光灯的长度而设定。