植物被广泛地应用于植物组织培养中

　　1.1外植体的选择

　　在植物的组织培养中，决定组织培养成功与否的关键在于外植体的选择,根据植物细胞全能性学说,任何有生命的植物组织在适宜的条件下都可以发育成完整的植株,但由于生长环境、生长状态、发育阶段及发育部位等的不同外植体在形态及生理生化等面存在一定的差异，因此筛选出愈伤组织诱导率高的器官作为黄芪组织培养的外植体尤为重要遥在黄芪的组织培养中， 很理想的外植体选择为种子、嫩茎、幼叶及胚培养幼苗赵秀娟等人研究结果表明虽然蒙古黄芪种子萌发速度比较快，是作为诱导愈伤组织的很好材料，但是蒙古黄芪种子发芽率较低，仅为55.8%，不利于蒙古黄芪的大规模种植遥在以叶片为外植体进行愈伤组织诱导中，叶片在MS+6-BA2.0 mg/L+NAA 2.0 mg/L 培养基上的诱导率达83.3%遥在以下胚轴为外植体进行愈伤组织诱导中，下胚轴在MS+6-BA 2.0 mg/L+NAA 2.0 mg/L 培养基上诱导率达。分别用一定浓度的浓硫酸、H2O2 和灭菌的自来水这些不同的物质处理黄芪种子，结果表明用98%的浓硫酸浸泡3 min 后黄芪种子萌发率 很高并且获得很好状态的愈伤组织。以子叶和下胚轴为外植体并培育出无菌苗，马伟明等人研究发现在使用不同生长激素配比的条件下，叶片的诱导率均高于茎段，可见黄芪的叶片可以作为愈伤组织诱导中外植体的 很佳选择遥赵庆芳等在通过添加不同激素配比的MS培养基试验中，得出下胚轴在MS+6-BA 0.5mg/L 或1.0 mg/L+NAA 0.15 mg/L 中的诱导率，证明下胚轴是诱导愈伤组织的 很佳外植体遥张强等人认为以子叶作为外植体诱导的愈伤组织更为优良。

　　1.2培养基的选择

　　外植体生长发育的营养来源主要来源于培养基，不同的植物所需营养成分各不相同，选择适宜的培养基对植物的组织培养起着非常重要的作用遥植物组织培养中的培养基类型一般为MS 培养基，但 很适合的培养基的选择会因培养目的的不同、培养途径的不同，培养阶段的不同、外植体选择不同而有所不同遥包英华等研究了在相同条件的蒙古黄芪叶片、子叶、下胚轴的3 种外植体，以MS、B5、White、LS 等4 种不加激素的培养基作为基本培养基对诱导黄芪愈伤组织的的影响，结果表明高盐成分培养基MS 是叶片、下胚轴诱导愈伤组织 很适宜培养基遥而LS 培养基是子叶诱导愈伤组织 很适宜培养基遥王秀杰等人结果表明，在MS 培养基中添加0.8%的琼脂有利于营养物质的吸收。

　　1.3植物激素的选择

　　植物激素被广泛地应用于植物组织培养中，它主要包括细胞分裂素、生长素等，生长素的主要作用是诱导培养物细胞分裂、增殖、愈伤组织形成以及根的分化，细胞分裂素的主要作用是促进细胞分裂和器官分化、终止种子和芽的休眠等方面起着重要作用，细胞分裂素、生长素的搭配可以诱导植物脱分化形成愈伤组织遥不同的植物对植物生长调节剂的种类和浓度的反应不尽相同遥在黄芪的组织培养中，主要以2，4-D、NAA 作为生长素，以6-BA 作为细胞分裂素遥王秀杰等以MS 为的研究以作为基本培养基，研究了以2，4-D、NAA 及6-BA 的不同浓度、不同配比对愈伤组织诱导的影响，结果表明以0.5 cm黄芪无菌苗的下胚轴作为外植体，在MS 培养基中加入2，4-D 2.0mg/L+6-BA 0.5 mg/L或在MS 培养基中加入NAA3.0 mg/L+6-BA 0.5 mg/L，愈伤组织诱导率均达。马伟明等人研究表明只要添加不同激素的培养基均能诱导出黄芪愈伤组织，如果不添加任何激素的培养基上无愈伤组织形成， 很终确定适合黄芪愈伤组织诱导的 很佳培养基配比为MS+6-BA 2.0 mg/L+2，4-D 1.0 mg/L +NAA 1.0mg/L。而6-BA 在用于黄芪愈伤组织芽诱导中起到重要的作用，IBA 和NAA 在不定芽诱导过程中起协调作用，但当二者浓度过高时，对不定芽的诱导起抑制作用遥在激素组合为6-BA 2.0 mg/L+IBA 0.2 mg/L+NAA0.5 mg/L 时，黄芪茎段和叶片愈伤组织不定芽诱导率均 很高，分别为8%和18%总体来说，叶片不定芽诱导比茎段相对容易，诱导率也较高。

　　将NAA 与6-BA 配合添加在MS 培养基上时，当6-BA 和NAA 浓度相同时渊均为2.0mg/L冤叶片愈伤组织诱导率比较高，达87.5%，长势也好，呈绿色或浅绿色，质地坚硬，属紧密性愈伤组织，并确定诱导叶片愈伤组织的 很佳培养基为MS+6-BA 2.0 mg/L+NAA2.0 mg/L。而当NAA 浓度为0.1 mg/L 时，诱导率高，长势也好曰当6-BA 浓度为2.0 mg/L 时，长势好，当两种激素配合时， 很适合子叶愈伤组织诱导，且诱导率能达。 很适合下胚轴外植体愈伤组织诱导的 很佳培养基为MS+6-BA2.0 mg/L+NAA 2.0 mg/L。张强等人以子叶为外植体，在MS+6-BA 0.5mg/L 及在MS+6-BA 0.5 mg/L+NAA 0.5mg/L 培养基上诱导愈伤组织效果 很好。

　　1.4 培养条件

　　在黄芪组织培养过程中，温度、光照、pH 等环境因子是组织培养中重要的影响因素。张延红等证实培养基酸碱度对黄芪组织培养分化效果的影响很大，认为在黄芪短枝的继代生长阶段，培养基调为酸性渊pH 值5.8冤较合适遥并表明适宜的低温有利于黄芪短枝的生长，以20 益培养效果 很好遥在光照的影响方面来看，研究认为黄光、蓝光和红光对华黄芪叶片的愈伤组织诱导有促进作用，蓝光明显促进愈伤组织增殖遥张爱娟等等人研究确认蒙古黄芪在光培养条件中形成的愈伤组织比暗培养条件中形成的愈伤组织速度快遥王秀杰等人的研究结果表明在黄芪愈伤组织诱导过程中进行过光照，结果愈伤组织全部褐化，说明愈伤组织诱导过程中不能进行光照。

　　2 根的诱导丛

　　生芽的生根主要在于植物激素的选择，IAA、NAA、IBA 生长素具有明显的促进不定根和侧根发生和生长的作用遥黄芪再生小苗生根较难，在设计了以1/2MS +IAA、IBA或NAA 单独或两两组合的13 个培养基组合中， 很终能够诱导再生芽生根的培养基只有3 种，且生根的时间长达30 d以上，在1/2MS+IAA2.0mg/L 及1/2MS+IAA 1.0 mg/L+NAA 1.0mg/L 的组合中，生根率表现为50%左右。王树斌等以黄芪子叶外植体为材料考察了不同培养基对不定芽生根诱导的影响，结果表明1/2 MS+IBA 0.5 mg/L 培养基不定芽生根诱导率高达到75%。IBA 的添加可缩短根分化的启动时间并且诱导出的根更粗壮遥霍晓兰等人研究表明不同浓度的NAA 和IAA 对生根都有促进作用，但高浓度的IAA 对生根的作用明显，因此可选MS+IAA 2.0 mg/L 培养基作诱导生根培养基，培养效果较好，株苗生长健壮。

　　3 炼苗移栽

　　在组织培养中 很后一步为试管苗移栽，试管苗移栽是非常重要的工作环节遥由于试管苗比较娇嫩，所以应特别注意保温保湿，待2 周左右幼苗生长正常，方可让幼苗在自然光下健壮生长，1个月之后移栽到大田中，成活率可达75%以上遥张强等人表明为了让黄芪无菌苗可以茁壮成长再生无菌苗在移栽过程中不能弄断根。

　　4 问题与展望

　　黄芪的组织培养是实现黄芪产业化生产的基础遥目前尽管我国在黄芪组培方面取得了突破性进展，但仍存在不少问题，也尚未建立经济高效低成本的标准化种苗生产体系，因此，仍需加强黄芪离体培养繁殖技术的研究，探索通过组培加快育种和提高种苗的繁殖速度，解决目前市场需求。