一、基本设备配置
(一)常规设备
1、天平 组织培养实验室需要2-3台不同精度的天平。 感量0.001g的天平(分析天平)和感量0.0001g的天平(电子天平)用于称量微量元素和一些较高精确度的实验用品。 感量0.01g和0.1g的天平,用于大量元素母液配制和一些用量较大的药品的称量。
2、冰箱 各种维生素和激素类药品以及培养基母液均需低温报存,某些试验还需植物材料进行低温处理,一般普通冰箱即可。
3、酸度计 用于测定培养基及其它溶液的pH,一般要求可测定pH范围1-14之间,精度0.01即可。
4、离心机 用于细胞、原生质体等活细胞分离,亦用于培养细胞的细胞器、核酸以及蛋白质的分离提取。根据分离物质不同配置不同类型的离心机。 细胞、原生质体等活细胞的分离用低速离心机;核酸、蛋白质分离用高速冷冻离心机;规模化生产次生产物,还需选择大型离心分离系统。
5、加热器 用于培养基的配制。研究性实验室一般选用带磁力搅拌功能的加热器,规模化大型实验室用大功率加热和电动搅拌系统。
6、其它 纯水器、分装设备
(二)灭菌设备 维持相对得无菌环境是组织培养实验室的基本要求。
1、高压灭菌锅 用于培养基、玻璃器皿以及其它可高温灭菌用品的灭菌,根据规模大小有手提式、立式、卧式等不同规格。
2、干热消毒柜 用于金属工具如镊子、剪刀、解剖刀,以及玻璃器皿的灭菌。一般选用200℃左右的普通或远红外消毒柜。
3、过滤灭菌器 用于一些酶制剂、激素以及某些维生素等不能高压灭菌试剂的灭菌,主要有真空抽滤式和注射器式。4、紫外灯 方便经济的控制无菌环境的装置,缓冲间、接种室和培养室必备。
(三)无菌操作设备
1、接种箱 是使用较早的简单的无菌装置,主体为玻璃箱罩、入口有袖罩,内装紫外灯和日光灯,使用时对无菌室要求较高。
2、净化工作台 其操作台面是半开放区,具方便、操作舒适点,通过过滤的空气连续不断吹出,大于0.03um直径的微生物很难在工作台的操作空间停留,保持了较好的无菌环境。由于过滤器吸附微生物,使用一段时间后过滤网易堵塞,因此应定期更换。
(四)培养设备 培养设备是指根据需要所选用的不同规格和控制精度的用于植物细胞、组织和器官培养的设施和设备。
1、培养架 目前所有植物组织培养实验室植株繁殖培养的通用设施。成本低、设计灵活、可充分利用培养空间,以操作方便、大限度利用培养空间为原则。一般有4-5层,层间间隔40-50cm,光照强度可根据培养植物特性来确定,一般每架上配备2-4盏日光灯。
2、培养箱 细胞培养、原生质体培养等要求精确培养的实验,可用光照培养箱、CO2培养箱、湿度控制培养箱等培养。
3、摇床 进行液体培养时,为改善通气状况,可用振荡培养箱或摇床。
4、生物反应器 进行植物细胞生产次生产物的实验室,还需生物反应器。 (五)其他设备 可安装时间程序控制器、温度控制系统或空调;实体显微镜、倒置式生物显微镜及配套的摄影、录像和图像处理设备;电泳仪、萃取和层析设备、紫外分光光度计、液相色谱仪、气相色谱仪、酶联免疫测定系统。
完整植物组织培养程般包括几步骤:
(1)准备阶段
查阅相关文献根据已功培养相近植物资料结合实际制订切实行培养案根据实验案配制适化消毒剂及同培养阶段所需培养基并经高压灭菌或滤除菌备用
(2)外植体选择与消毒
选择合适部位作外植体采经适预处理进行消毒处理消毒外植体菌条件切割定块或剥离茎尖挑花药接种初代培养基
(3)初代培养
接种材料置于培养室或光照培养箱培养促使外植体已化细胞脱化形愈伤组织或顶芽、腋芽直接萌发形芽愈伤组织转移化培养基化同器官原基或形胚状体发育形再植株
(4)继代培养
化形芽、原球茎数量限采用适继代培养基经切割转接芽苗繁殖定数量再部用于壮苗根另部保存或继续扩繁进行脱毒苗培养需提前进行病毒检测
(5)根培养
刚形芽苗往往比较弱数根降低细胞裂素浓度或加提高素浓度促进苗根提高其健壮度
(6)炼苗移栽
选择健壮根苗进行室外炼苗待苗适应外部环境再移栽疏松透气基质注意保温、保湿、遮荫防止病虫危害组培苗完全并定即移向田用于产
:茎尖→表面消毒→接种诱导培养基→茎尖→病毒检测鉴定→培养根植株→培养根→完整植株→炼苗20-25→移栽