(一)目的
植物组织培养为一基本生物技术。植物之无土繁殖、无病毒植株生产、植物生理、形态、遗传等研究,均可利用比技术为工具。而且具不受限于季节、度地、在小空间即可完成等优点。本实验及利用时地操作,令学生学习相关的知识与技巧。
(二)原理
利用细胞分化之性,以任何单胞拥有与母本相同的遗传组成,来发育成与母本相同性状的潜能。同理也可解释植物的再生现象,不同植物种类具有不同再生能力,例如:非洲董叶插,可于切口处再生新的植株。而器官发生则是植物于再生的途径中导向根或芽等器官之形成。
(三)材料
蝴蝶兰或其他植物
(四)设备
无菌操作台、植物组织切剪器材及捏子、70%酒精、培养皿、恒温箱
(五)药品
MS培养基
(六)步骤
1. 首先切取根尖或茎顶等生长点(这会比较好操作)。
2. 将取用部位以自来水冲洗,并将杂质蜘蛛网等等,去除乾淨。
3. 将其放入1%次氯酸钠含1-2滴展着剂(三角瓶或血清瓶装置),放置超音波震1-2分,而后手摇10分钟。
4. 将使用之瓶灌使用70%酒精喷覆其外部,放入无菌操作台内。
5. 将瓶口先用火烤过,打开将1%次氯酸钠倒除。
6. 用无菌水清洗2-3次,甚至直至乾淨为止。
7. 用捏子将果夹取出,放置以消毒过培养皿。
8. 利用刀子将切取部位切出约0.5公分之大小,置于无菌培养基上。
9. 封好瓶盖,在放置培养室培养。
(七)注意事项
1. 操作台,先将手清洗乾淨,用酒精消毒。
2. 如果操作台,风是向外吹的,在操作过程中,尽量少说话,及头部勿伸入操作台内。
3. 手不要挥过以打开之培养器皿及操作器皿。
4. 在操作过程中,操作培养皿常换,及刀具每次使用后,用火烤过。
5. 手上酒精未乾时,先不要操作,以免烤刀具时,火烧手。
6. 接种用的刀、镊子、剪刀等,使用前需用酒精棉花擦拭乾淨,然后在火焰上灼烧。冷却后,在无菌条件下,将器具在95% 酒精中浸一下,取出后放在酒精灯上烧一下,安放在玻璃架上,待冷却后使用。
7. 可将刀放在电热杯的开水中煮沸5分钟,冷却后待用。
8. 金属用具用酒精棉花擦拭乾淨后,风乾。然后用纸或铝盒,包装好,于高压蒸汽灭菌锅中灭菌,冷却后待用。