蝴蝶兰组培需要注意哪些事项？

　　蝴蝶兰属兰科蝴蝶兰属植物，其花形状奇异清秀，花大艳丽，具有极高的观赏价值和经济价值。随着人们生活水平的不断提高，蝴蝶兰的市场需求量也越来越大，但蝴蝶兰为典型的单茎性热带附生兰，植物很少发生侧枝，分株繁殖系数极低。其种子没有胚乳，自然条件下很难萌发，通过自身的营养繁殖和种子繁殖均不能满足工厂化育苗的要求。应用植物组织培养技术进行蝴蝶兰的快速繁殖可以缩短育苗周期，在短时间内获得大量成株。我们对蝴蝶兰花梗芽组织培养技术进行研究，取得了很好的效果，为工厂化育苗提供了可能。

　　1 外植体的选择和消毒

　　取蝴蝶兰花梗在自来水下用细软毛刷轻刷表面，并吸干表面水分，剪成2 一3cm 长的茎段。在工作台上按以下程序进行灭菌处理：将材料放入经高温灭菌过的烧杯中；加入70 ％的酒精浸泡20 秒；0 . 1 ％的HgCl 消毒8 分钟，分2 次进行，每次4 分钟，灭菌后用无菌水冲洗5 次，每次2 分钟；用解剖刀切除坏死部分后，接入培养基。用此方法既能有效地消毒又不会对培养材料产生毒害，培养材料接入培养基后无褐化坏死现象出现。

　　2 无菌材料的试管培养

　　培养材料的选择是蝴蝶兰组培决繁的关键。腋芽节位以下第3 、4 节花梗芽是适宜的外植体，而谷胧甘肽200mg/L既能很好地抑制褐化，又能促进试管苗的生长和分化，是蝴蝶兰组织培养中合适的褐化抑制剂。B5+GA32.0mg/L＋NAAO.lmg/L是较适宜的愈伤组织诱导培养基，B5+6BA1.0mg/L＋NAAO.2mg/L是较适宜的分化培养基，1 / 2 MS + IBA1.2mg/L＋NAA0.05mg/L及2 %蔗糖是较适宜的生根培养基。

　　将消毒后的无菌培养材料接种在愈伤组织诱导培养基上，其培养基为B5+GA32.0mg/L＋NAAO.lmg/L，培养基pH 调至5.8 ，培养室温度控制在24 士2 ℃ 。接种后遮光放置4 一5 天，而后每天光照12 小时，2 周后，切口处开始膨大，产生淡绿色瘤状愈伤组织，并不断增大。4 周后将愈伤组织切下转接到分化培养基B5+ 6 BA1.0mg/L＋NAA0.2mg/L上，转瓶后愈伤组织的体积和重量成指数级增加，4 周左右愈伤组织表面出现较大绿色颗粒，并形成芽点，继而分化出丛生芽。分化时出现褐化现象，可加入20omg 几谷胧甘肤解除。当丛生苗长到3 一4cm 、具有4 一5 片叶时，将其移到生根培养基1 / 2 Ms + IBA1.2mg/L十NAAO.05mg/L 2 ％蔗糖上，10 天后切口基部开始出现白色的根状突起，25 天后，每株生根4 条以上，生根率为95 ％以上。

　　3 试管苗的炼苗移栽

　　试管苗移栽前需要有炼苗的过程，移栽前5 天左右，在室内将封口膜打开1 / 3 左右，使幼苗与空气有一定接触。2 天后，移栽到驯化温室内，使幼苗完全暴露在空气中，要适当遮阳，避免高温和强光直接照射，3 天后即可移栽。移栽时将幼苗取出，放在1 000 倍的多菌灵水溶液中小心洗去根部的培养基，去掉老叶，放入铺有湿报纸的盒子，要注意保湿。栽培基质为经过高温消毒后的苔鲜，用镊子划痕后，夹住幼苗根部，插入至第1 轮叶，用手小心压紧，用薄膜覆盖，保持温度在21 一25 ℃ ，相对湿度60 ％一80 % ，控制好水分和温度，移栽成活率可达90 ％以上。当新叶长出、新根伸长时，每周用0.3 ％一0.5 ％磷酸二氢钾进行叶面施肥1 次，成苗率达80 ％以上。