植物组培茎尖培养

　　概念：是切取茎尖部分或茎尖分生组织部分，进行培养的过程。这是组织培养中用得较多的外植体。因为茎尖分生区是四个分区的主要部分。

　　茎尖培养可分为微茎尖培养和普通茎尖培养。

　　1)微茎尖：指带有1-2个叶原基的生长锥，其长度不超过0.5mm。(图)

　　2)普通茎尖：指取几mm到几十mm长的顶芽尖及侧芽尖。这里主要介绍后者。

　　特点：技术简单，操作方便，易成活和分化，成苗时间短。

　　步骤如下：

　　1．取材：挑选洁净、无污染，生长不久的茎，从植物的茎、藤或匍匐枝上切取2cm以上的顶梢。木本植物可事先对茎尖喷几次灭菌药剂。用于普通茎尖培养。

　　2．消毒  将采到的茎尖切成0.5～1.0cm长，并将大叶除去，休眠芽预先剥除鳞片。(图)将茎尖置于流水冲洗干净，再在95%的酒精中处理30秒，然后在稀释20倍的次氯酸钠中浸5～８分钟，最后用无菌水冲洗数次，沥干后准备接种。

　　3．接种  为了减少污染，在接种前再剥掉一些幼叶，使茎尖为0.5cm大小左右。用作快速繁殖。

　　注意：一要防褐化。接种时，不用锈刀，动作敏捷，随切随接，用1～5%VC液浸泡处理。

　　二要防干燥

　　4．培养

　　（1）培养基：采用MS培养基或略加修改，或补加其它物质。也可用其它培养基如White,Heller等。

　　培养基中生长素是必须的，如2,4-D，IAA,NAA等，但是浓度不能太高，一般用0.1mg/L左右，若高易产生畸形芽或形成愈伤组织。

　　（2）培养问题处理：

　　茎尖在培养过程中会出现生长太慢、生长太快和生长正常等三种类型。

　　I生长太慢：接种后茎尖不增大，只是茎尖逐渐变绿，出现绿色小点，细胞逐渐老化而进入休眠状态，或者逐渐变褐死亡。引起原因的是生长素浓度太低，或是温度过低或过高；

　　II生长太快型：是接种后茎尖迅速增大，在茎尖基部产生愈伤组织，并迅速增殖，而茎尖不伸长，久之茎尖也形成愈伤组织，从而丧失发育成苗的能力。引起原因一是生长素浓度过高，引起细胞疯狂分裂而导致愈伤组织的形成。二是光照太弱或温度太高。

　　III生长正常型是接种后茎尖基部稍增大并形成少量愈伤组织，茎尖颜色逐渐变绿，并逐渐伸长，叶原基发育成可见的小叶，进而形成小苗。

　　（3）培养条件：培养时每天光照可长一些，最长达16h/d，照度1500-3000Lx，温度25±2℃。并且根据不同植物种类，或者随培养过程的不同，给予适当的昼夜温差等处理。

　　注意：防培养基干燥，由于茎尖培养时间较长，通过定期转移、严加封口等。一般茎尖培养在４０天左右可直接长成新梢。

　　（3）继代培养  用茎段切割法。

　　继代培养可用MS0培养基。或用生长物质较低的MS培养基。

　　也可边增殖边生根培养

　　（4）诱导生根

　　I） 用1/2 MS培养基， 并只加入生长素类调节物质，如NAA 、IBA等。注意浓度

　　II）也可将切下的新梢基部浸入50或100ppm的IBA溶液处理4～8小时，然后转移到无激素的生根培养基中。

　　III）注意较高浓度的生长素对生根有抑制作用。

　　5．移栽驯化

　　指标：发现新梢基部生有较浓密的不定根，生长健壮而发达，长度在1cm以内。

　　移栽：可先进行几天炼苗程，取出---洗培养基--栽入驯化器皿—基质蛭石：珍珠岩：草炭土为1:1:0.5。

　　栽后管理：1)初期保持湿度。基质浇透水，床面浇湿，搭小拱棚等，并且初期要常喷雾处理，2)后期逐渐减少湿度。拱棚两端打开通风，减少喷水次数。以后揭去拱棚，并控制水分。

　　温度管理上要掌握适宜的生根温度，最适宜的温度是16～20℃，春季地温较低时，可用电热线来加温。

　　光照：初期弱光照，加盖遮阳网或报纸等，后期可直接利用自然光照。