植物组织培养与细胞培养开始于19世纪后半叶,当时植物细胞全能性的概念还没有完全确定,但基于对自然状态下某些植物可以通过无性繁殖产生后代的观察,人们便产生了这样一种想法即能否将植物体的一部分在适当的条件下培养成一个完整的植物体,为此许多植物科学工作者开始了培养植物组织的尝试。最初的问题仍然是集中在植物细胞有没有全能性和如何使这种全能性表现出来。
1839年Schwann提出细胞有机体的每一个生活细胞在适宜的外部环境条件下都有独立发育的潜能。1853年trecul利用离体的茎段和根段进行培养获得了愈伤组织,愈伤组织是指一种没有器官分化但能进行活跃分裂的细胞团,但这还不能证明细胞具有全能性,因为由愈伤组织没能再生出完整植物体。
1901年Morgan首次提出一个全能性细胞应具有发育出一个完整植株的能力。所谓全能性细胞就是指具有完整的膜系统和细胞核的生活细胞,在适宜的条件下可通过细胞分裂与分化,再生出一个完整植株。White指出:如果一个给定的有机体的所有细胞都大致相同,并具有全能性,那么在有机体内所观察到的细胞分化必定是这些细胞对有机体内微环境和周围环境的反应。就是说机体内每个细胞所以没有表现出全能性,是因为该细胞所处位置的不同,致使其某些功能被抑制(suppressed),这充分说明机体内的微环境因素在细胞分化中起了十分重要的作用。按照现代发育生物学和细胞生物学的理论,细胞分化是受基因在时间和空间两个方面的调控,空间就是指细胞在机体内所处的位置。不同位置的细胞,其基因的表达不同,细胞所表现出的形态结构和行为就不同。如果将一个生活的细胞从植物体内分离出来,使之脱离开原有的环境,细胞被抑制的功能将有望得以恢复,重新表现出全能性。基于这种认识,科学工作者便萌生出了植物组织培养的念头。
组培育苗必要的仪器设备:为了顺利地开展组培育苗工作,要建立一套组培育苗工作的设施,其中包括准备室、接种室、培养室和相应的温室等。建筑面积可根据工作量的大小而定。
(1)准备室主要功能是贮放配制培养基所必需的化学试剂及仪器设备,如冰箱、烘箱、天平、显微镜、酸度计、高压灭菌锅、玻璃器皿及洗涤设施等,并为配制培养基、分装和灭菌等操作提供便利的条件。
(2)接种室主要供接种、转移和继代培养用。要求室内光洁,能在无菌条件下进行操作。一般是购置超净工作台,配备用于对外植体进行分割、消毒和接种的工具和器皿等。
(3)培养室主要为试管植物的生长发育提供适宜的环境条件。要求有控制温度和照明的设备、放置试管等物的架子、消毒用紫外灯等。
2.培养基的组成与配制:培养基是用于组织培养繁育花苗的物质。它包括植物的细胞、组织或器官再生所必需的大量元素、微量元素、蔗糖、维生素、氨基酸和植物激素等。
用于繁殖花卉植物常用的培养基有:MS、H、N6、尼许(Nitsh)、怀特(White)、米勒(Miller)培养基等。
配制培养基与配制营养液基本相同,只是在加入无机盐之后不定容,而是以每升培养基所需的粉剂原料加水800毫升左右,加热煮沸,使琼脂完全融溶,冷却到80℃左右加入蔗糖,60℃左右加入有机物,调节氢离子浓度并定容,在温度尚未降至40℃以前,尽快分装到试管或三角瓶中,用棉塞或牛皮纸封口,然后在120℃温度下灭菌15分钟。